Outils biologiques
Au cours des dernières années, nous avons développé de nombreux outils pour étudier le mucus et les mucines. Parmi ceux-ci, en voici quelques-uns qui pourraient vous être utiles dans le cadre de vos recherches.
Anticorps
Anticorps anti-Muc6 murin (polyclonal de lapin). Dirigé contre le peptide TSKIPVTQTTTHRVPSRCIT, situé en amino-terminal des répétitions en tandem de Muc6 (acides aminés 1 387 à 1 406, GenBank : AY184388.1). Pour le Western blot et l'immunohistochimie. Disponible sur demande.
Coupes sériées montrant un marquage intense des cellules glandulaires profondes avec l'anticorps anti-Muc6 (CP4), et la présence de Muc6 dans les couches de mucus, tandis que Muc5ac est produit dans l'épithélium superficiel/fovéolaire, conformément à la distribution observée chez l'humain.
Cet anticorps a été utilisé dans les études suivantes :
♦ Histochem Cell Biol. 2010; doi: 10.1007/s00418-010-0688-8
♦ Histochem Cell Biol. 2019; doi: 10.1007/s00418-019-01785-5
Anticorps anti-Muc5b murin (polyclonal de lapin). Dirigé contre le peptide de 19 aa DVSSGLVCYNKDQGGTFQM retrouvé dans les domaines CYS #2/3/5 de Muc5b. Pour l'IHC, disponible sur demande.
← Immunofluorescence montrant Muc5b (vert) dans des bronches. Cet anticorps a été utilisé dans les études suivantes :
♦ Histochem Cell Biol. 2011; doi: 10.1007/s00418-011-0872-5
♦ PLoS One 2012; doi: 10.1371/journal.pone.0046699
♦ Sci Rep. 2017; doi: 10.1038/srep44591
♦ Histochem Cell Biol. 2019; doi: 10.1007/s00418-019-01785-5
♦ Biol Open 2019; doi: 10.1242/bio.046359
♦ iScience 2022; doi: 10.1016/j.isci.2022.104526
Mini5B expression plasmid
Plasmide d'expression Mini5B : Promoteur hybride eucaryote + intron + Mini5B + Ires-Luc. Le plasmide contient une cassette Neo pour une transfection stable. Le Mini5B est constitué de deux domaines CYS de MUC5B encadrant une séquence TR complète de MUC5B, avec un site de N-glycosylation fonctionnel à l'extrémité C-terminale.
Cette construction, avec ou sans la cassette Ires-Luc, a été utilisée dans les études suivantes :
♦ PLoS One 2012; doi: 10.1371/journal.pone.0046699
♦ Biochem Biophys Res Commun. 2018; doi: 10.1016/j.bbrc.2018.10.138
Transgenic mice
Tff3-rCYSx12-GFP
Tff3-rCYSx12-eGFP. Souris transgénique : production et sécrétion d'une molécule recombinante CYSx12 (MUC5B humaine) marquée par meGFP sous contrôle du promoteur Tff3 dans l'intestin de la souris. Grâce à son grand promoteur Tff3 (mItf), cette souris transgénique peut être utilisée comme souris rapporteur Tff3-eGFP. Disponible dans le cadre d'un accord de transfert de matériel (MTA) collaboratif. Nom officiel : Tg(Tff3/MUC5B/GFP)222
Immunofluorescence montrant rCYSx12-eGFP (vert) secrété avec Muc2 (rouge) dans le mucus colique. La souris transgénique a été utilisée dans les études suivantes :
♦ Sci Rep. 2015; doi: 10.1038/srep09577
♦ Sci Rep. 2019; doi:10.1038/s41598-019-53547-x
♦ Gut Microbes 2020; doi: 10.1080/19490976.2020.1800897
♦ iScience 2022; doi:10.1016/j.isci.2022.104526
Tff3-rCYSx12. Variant sans le tag eGFP (appelé Tg208 ou K208) est distribué par l'EMMA (B6;D2-Tg(Tff3/MUC5B)208Jlcd/Cnbc). Les homozygotes sont viables. Pour les détails, voir : MGI/Jax.
Reporter Muc5b-meGFP and derived Muc5b knockout
Muc5btm2.1Jlcd ; Muc5btm2.2Jlcd
Souris rapporteur eGFP pour Muc5b obtenu par recombinaison homologue (knockin). La glycoproétéine complète Muc5b est tagguée avec l'eGFP monomérique. Les deux derniers exons de Muc5b sont floxés, permettant de générer un knockout conditionnel de Muc5b. Disponible via un MTA collaboratif.
La lignée rapporteur et KO tous-tissus ont été utilisées dans les études suivantes :
♦ Sci Rep. 2017; doi: 10.1038/srep44591
♦ PLoS One 2017; doi: 10.1371/journal.pone.0174764
♦ Histochem Cell Biol. 2019; doi: 10.1007/s00418-019-01785-5
♦ iScience 2022; doi: 10.1016/j.isci.2022.104526
Muc4 knockout
Knockout Muc4. Souris knockout Muc4 obtenu par recombinaison homologue. Le premier exon a été excisé. Ce modèle transgénique n'a pas été publié. Disponible @ Infrafontier/EMMA. Stock EM:15255