Rôle pathogène des auto-anticorps dans la ScS

Les auto-anticorps (Aab) sont présents chez la plupart des patients atteints de ScS et constituent d'importants biomarqueurs de diagnostic et de pronostic (les ANA tels que les ATA, mais aussi des anticorps fonctionnels comme ceux ciblant les CE). Pourtant, leur rôle physiopathologique reste incertain. Nous avons précédemment rapporté que : (i) les IgG purifiées de patients atteints de ScS pouvaient modifier l'ensemble des profils protéomiques/transcriptomiques des FB, (ii) les IgG purifiées du groupe ScS avec ATA induisaient un profil singulier et pro-fibrotique sur les FB par rapport aux autres sérotypes. Ces données suggèrent un possible rôle pathogène direct des auto-anticorps dans la ScS, en particulier des ATA. Étant donné que ce travail initial non biaisé sur les profils multiomiques induits par les IgG purifiées nous a permis d'isoler un endotype potentiel représenté par le sérotype ATA, et que les ANA sont utilisés dans la gestion quotidienne de routine des patients, nous nous concentrerons plus spécifiquement sur le rôle pathogène potentiel des ATA sur différents types cellulaires ciblés par la ScS. De plus, nous développerons des approches complémentaires incluant d'autres sérotypes ou des anticorps fonctionnels tels que les anti-récepteurs de l'endothéline ou de l'angiotensine. Nous visons à comprendre le rôle pathogène des IgG purifiées ou des auto-anticorps isolés de la ScS sur des cellules effectrices clés, à savoir les FB, les CE, les kératinocytes et les cellules du tractus digestif (en collaboration avec le WP2).

Pour étudier plus en détail l'interaction entre les FB et les IgG dans la ScS, nous évaluerons 1. l'activation des voies biologiques dans les FB par des approches de phosphoprotéomique et de cinétique ainsi que le sécrétome des FB après incubation avec des IgG totales purifiées de patients atteints de ScS positifs pour les ATA ou des IgG ATA purifiées et des ATA monoclonaux (collaboration Eric Meffre, Stanford), 2. la fixation à la membrane et le trafic intracellulaire. Les FB dermiques seront cultivés en présence d'IgG totales purifiées de patients atteints de ScS avec ou sans ATA ou de témoins sains, ou en présence d'IgG ATA purifiées. Les conséquences des IgG totales purifiées ou des ATA purifiés sur les FB seront évaluées en analysant le phosphoprotéome, les compartiments cellulaires et les exosomes par spectrométrie de masse couplée à la chromatographie en phase liquide (LC-MS/MS). La détermination de l'interaction entre les ATA et les FB sera réalisée par microscopie confocale.

Nous mettrons en place un modèle in vitro de CE de veine ombilicale humaine sur lequel nous appliquerons les mêmes conditions expérimentales que sur les FB. Notre cohorte sera composée de patients avec des ATA, de patients avec des anticorps anti-centromères, de patients avec des anti-ARN polymérase III et de sujets sains. L'effet des anticorps sera mesuré par des techniques omiques à haut débit (LC-MS/MS et séquençage de l'ARN) et complété par des approches conventionnelles (ELISA, WB, IF) pour confirmer les cibles identifiées.